pdf35Ribogospod. nauka Ukr., 2017; 2(40): 60-67
DOI: https://doi.org/10.15407/fsu2017.02.060 
УДК 597-115.08:639.371.2

Розробка методики ДНК-ідентифікації осетрових видів риб з використанням полімеразної ланцюгової реакції в реальному часі

В. Г. Спиридонов, Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її. , Інститут ветеринарної медицини НААН України, м. Київ

Мета. Розробити та провести апробацію методики ДНК-ідентифікації видової приналежності осетрових риб із використанням полімеразної ланцюгової реакції в реальному часі.

Методика. Для проведення ДНК-ідентифікації осетрових риб використовували ПЛР з детекцією результатів у реальному часі.

Результати. На основі використання ПЛР у реальному часі розроблено та апробовано методику видової ДНК-ідентифікації таких видів осетрових риб, як білуга (Huso huso Linnaeus), російський осетер (Acipenser gueldenstaedtii Brandt), стерлядь (Acipenser ruthenus Linnaeus) та севрюга (Acipenser stellatus Pallas). За отриманими результатами аналітичної специфічності та порівнянням параметрів ампліфікації було встановлено специфічну ампліфікацію та відсутність перехресних реакцій для фрагментів плавців та ікри досліджуваних видів осетрових риб. Запропонована методика ДНК-ідентифікації може використовуватися для встановлення видової приналежності осетрових риб, що дозволить контролювати виробництво конкурентоспроможної продукції аквакультури, яка буде відповідати вимогам CITES.

Наукова новизна. Вперше проведено розробку та апробацію методики видової ідентифікації осетрових риб з використанням ПЛР в реальному часі.

Практична значимість. Видова ідентифікація осетрових риб дозволить контролювати виробництво конкурентоспроможної та легалізованої продукції аквакультури, яка буде відповідати вимогам CITES, а також забезпечить виконання стратегічного напрямку держави з продовольчої безпеки України.

Ключові слова: ДНК-ідентифікація, полімеразна ланцюгова реакція у реальному часі, мітохондріальні ДНК-маркери, осетрові види риб.

ЛІТЕРАТУРА

  1. Войнова Н. В. Генетическая паспортизация осетровых: практические и теоретические аспекты. Москва: ВНИРО, 2004. 189 с.
  2. Мюге Н. С. Полиморфизм контрольного региона митохондриальной ДНК восьми видов осетровых и разработка системы ДНК-идентификации видов//Генетика. 2008. № 7. С. 913—919.
  3. Identification of interspecific hybrids by amplified fragment length polymorphism: the case of sturgeon/ Congiu L. et al.//Mol. Ecol. 2001. Vol. 10. P. 2355—2359. https://doi.org/10.1046/j.0962-1083.2001.01368.x 
  4. Применение молекулярно-генетических исследований в аквакультуре осетровых рыб/Козлова Н. В. и др.//Вестник АГТУ. 2013. № 3. С. 113—117. (Серия: Рыбное хозяйство).
  5. Барминцева А. Е. Использование микросателлитных локусов для установления видовой принадлежности осетровых (Acipenseridae) и выявления особей гибридного происхождения//Генетика животных. 2013. Т. 49, № 9. С. 1093—1105.
  6. Molecular genetic analysis among subspecies of two Eurasian sturgeon species, Acipenser baerii and A. stellatus/Doukakis P. et al.//Mol Ecol. 1999. Vol. 12. P. 117—127. https://doi.org/10.1046/j.1365-294X.1999.00816.x 
  7. Raymakers C. CITES, the Convention on International Trade in Endangered Species of wild fauna and flora: its role in the conservation of Acipenseriformes//J. Appl. Ichthyol. 2006. Vol. 22 (Suppl. 1). P. 53—65. https://doi.org/10.1111/j.1439-0426.2007.00929.x 
  8. Впровадження генетичної паспортизації осетрових в Україні/Малишева О. О. та ін.//Тваринництво України. 2015. № 9. С. 12—15.
  9. Генетическая паспортизация производителей осетровых рыб/Войнова Н. В. и др.//Новые технологии в защите биоразнообразия в водных экосистемах: Междунар. конф.: матер. Москва, 2002. С. 91.
  10. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Москва: Мир, 2002. 589 с.
  11. Kinetic PCR: Real time monitoring of DNA amplification reactions/Higuchi R. et al.//Biotechnology. 1993. Vol. 11. P. 1026—1030. https://doi.org/10.1038/nbt0993-1026 
  12. The polymerase chain reaction: clinical applications/White T. J. et al.//Adv. Clin. Chem. 1992. Vol. 29. P. 161—196. https://doi.org/10.1016/S0065-2423(08)60224-3 
  13. Jin Li G., Makrigiorgos G. M. Anti-primer quenching-based real-time PCR for simplex or multiplex DNA quantification and single-nucleotide polymorphism genotyping//Nature Protocols. 2007. Vol. 2, iss. 1. P. 50—58. https://doi.org/10.1038/nprot.2007.11 
  14. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве/Зиновьева Н. А. и др. Дубровицы: ВИЖ, 1998. 47 с.
  15. Rapid and Simple Method for Purification of Nucleic Acids/Boom R. et al.//Journal of Сlinical Microbiology. 1990. Vol. 28. P. 495—503.
  16. Carter M. J., Milton I. D. An inexpensive and simple method for DNA purifications on silica particles//Nucleic Acids Res. 1993. Vol. 21. P. 1044—1046. https://doi.org/10.1093/nar/21.4.1044 
  17. Ребриков Д. В., Саматон Г. А., Трофимов Д. Ю. ПЦР в реальном времени. 2-е изд., испр. и доп. Москва: Бином. Лаборатория знаний, 2009. 223 с.
Головна2017№ 2/2017 (40)2017-02_060-067_Spyrydonov