Ribogospod. nauka Ukr., 2013; 4(26): 66-74
DOI: https://doi.org/10.15407/fsu2013.04.066
УДК [597-146.3:597-146.5]:597.553.2

pdf35

ІДЕНТИФІКАЦІЯ СТАТІ У ДУНАЙСЬКОГО ЛОСОСЯ (HUCHO HUCHO) МЕТОДОМ ПОЛІМЕРАЗНОЇ ЛАНЦЮГОВОЇ РЕАКЦІЇ

Ю. П. Рудь, Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її. , Інститут рибного господарства НААН, м. Київ
В. Ю. Філіпов, Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її. , Інститут рибного господарства НААН, м. Київ
Л. П. Драган, Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її. , Інститут рибного господарства НААН, м. Київ
Л. П. Бучацький, Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її. , Інститут рибного господарства НААН, м. Київ

Мета. Проаналізувати нуклеотидні послідовності хромосоми Y лососевих видів риб і обрати фрагмент для підбору специфічних олігонуклеотидних праймерів та на основі ПЛР розробити метод ідентифікації статі у дунайського лосося H. hucho.

Методика. За допомогою алгоритмів ClustalW в програмному забезпеченні MEGA версії 5.2 було проаналізовано нуклеотидні послідовності хромосоми Y лососевих видів риб. Для розроблення експрес-діагностики статі у дунайського лосося було взято метод полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). Послідовність нуклеотидів у продуктах ампліфікації була досліджена секвенуванням.

Результати. На основі ПЛР розроблено метод ідентифікації статі у дунайського лосося H. hucho. Показано, що специфічні олігонуклеотидні праймери продукують амплікони розміром близько 450 пар нуклотидів, які характерні тільки для самців дунайського лосося. Підібрані праймери можуть бути використані для діагностики самців райдужної форелі Oncorhynchus mykiss, що свідчить про високy консервативність локусу sdY, який присутній в Y хромосомі більшості лососевих риб.

Наукова новизна. Визначено високо консервативний локус sdY для підбору специфічних олігонуклеотидних праймерів, які фланкують статевий ДНК-маркер у самців.

Практична значимість. Експрес-діагностика статі у дунайського лосося за допомогою розробленого методу дозволить ідентифікувати самців-реверсантів у процесі гормональної реверсії статі. На етапі відбору реверсантів цей метод дозволить ідентифікувати генотипових самців (XY) у дослідній групі, які не повинні використовуватись у наступному спаровуванні з метою отримання 100 %-го покоління самок дунайського лосося.

Ключові слова: дунайський лосось (Hucho hucho), статево-специфічний локус, ПЛР, реверсія статі.

ЛІТЕРАТУРА

1. Sacobie C. F. D. Sex differentiation and early gonadal development in brook trout / C. F. D. Sacobie, T. J. Benfey // North American Journal of Aquaculture. ― 2005. ― Vol. 67. ― P. 181―186. http://dx.doi.org/10.1577/A04-059.1
2. Genetic determination and temperature effects on turbot Scophthalmusmaximus sex differentiation : An investigation using steroid sex-inverted males and females / P. Haffray, E. Lebegue, S. Jeu [et al.] // Aquaculture. ― 2009. ― Vol. 294. ― P. 30―36. http://dx.doi.org/10.1016/j.aquaculture.2009.05.004
3. Sex change in coral reef fish / M. Nakamura, Y. Kobayashi, S. Miura [et al.] // Fish Physiology and Biochemestry. ― 2005. ― Vol. 31 (2-3). ― P. 117―122. http://dx.doi.org/10.1007/s10695-006-7595-x
4. Dunham R. A. Aquaculture and fisheries biotechnology: genetic approaches / Dunham R. A. ― CABI Publishing : Wallingford, 2004. ― 372 p. http://dx.doi.org/10.1079/9780851995960.0000
5. Sambrook J. Molecular cloning: a laboratory manual 3rd edition / J. Sambrook, D. W. Russell. ― New York : Cold Spring Harbour, 2001.
6. Chromosome painting supports lack of homology among sex chromosomes in Oncorhynchus, Salmo, and Salvelinus (Salmonidae) / R. B. Phillips, N. R. Konkol, K. M. Reed [et al.] // Genetica. ― 2001. ― Vol. 111. ― P. 119―123. http://dx.doi.org/10.1023/A:1013743431738
7. Rud Yu.P. PCR based method for rapid determination of sex in rainbow trout / Yu. P. Rud, I. B. Vladimirsky, L. P. Buchatsky // Aquaculture of Central and Eastern Europe : present and future. 2nd NACEE Conference (Chiсinău, October 17-19, 2011) : Pontos, Chiсinău, 2011. ― P. 224―226.
8. The sexually dimorphic on the Y-chromosome gene (sdY) is a conserved male-specific Y-chromosome sequence in many salmonids / A. Yano, B. Nicol, E. Jouanno [et al.] // Evolutionary Applications. ― 2013. ― Vol. 6. ― P. 486―496. http://dx.doi.org/10.1111/eva.12032
9. DMY is a Y-specific DM-domain gene required for male development in the medaka fish / M. Matsuda, Y. Nagahama, A. Shinomlya [et al.] // Nature. ― 2002. ― Vol. 417. ― P. 559―563. http://dx.doi.org/10.1038/nature751
10. Characterization of sex chromosomes in rainbow trout and coho salmon using fluorescence in situ hybridization (FISH) / P. Iturra, N. Lam, M. Fuente [et al.] // Genetica. ― 2001. ― Vol. 111. ― P. 125―131. http://dx.doi.org/10.1023/A:1013725717142
11. Devlin R. H. Sex determination and sex differentiation in fish: An overview of genetic, physiological, and environmental influences / R. H. Devlin, Y. Nagahama // Aquaculture. ― 2002. ― Vol. 208. ― P. 191―364. http://dx.doi.org/10.1016/S0044-8486(02)00057-1
12. Extensive screening of sturgeon genomes by random screening techniques revealed no sex-specific marker / S. Wuertz, S. Gaillard, F. Barbisan [et al.] // Aquaculture. ― 2006. ― Vol. 258. ― P. 685―688. http://dx.doi.org/10.1016/j.aquaculture.2006.03.042