pdf35Ribogospod. nauka Ukr., 2017; 2(40): 60-67
DOI: https://doi.org/10.15407/fsu2017.02.060 
УДК 597-115.08:639.371.2

Разработка методики ДНК-идентификации осетровых видов рыб с использованием полимеразной цепной реакции в реальном времени

В. Г. Спиридонов, Этот адрес электронной почты защищен от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра. , Институт ветеринарной медицины НААН Украины, г. Киев

Цель. Разработать и провести апробацию методики ДНК-идентификации видовой принадлежности осетровых рыб с применением полимеразной цепной реакции в реальном времени.

Методика. Для проведения ДНК-идентификации осетровых рыб использовали ПЦР с детекцией результатов в реальном времени.

Результаты. На основании использования ПЦР в реальном времени разработано и апробировано методику видовой ДНК-идентификации таких видов рыб, как белуга (Huso huso Linnaeus), русский осетр (Acipenser gueldenstaedtii Brandt), стерлядь (Acipenser ruthenus Linnaeus) и севрюга (Acipenser stellatus Pallas). По полученным результатам аналитической специфичности и сравнения параметров амплификации было установлено специфическую амплификацию и отсутствие перекрестных реакций для фрагментов плавников и икры исследуемых видов осетровых рыб. Предложенная методика ДНК-идентификации может использоваться для определения видовой принадлежности осетровых рыб, что позволит контролировать производство конкурентоспособной продукции аквакультуры, которая будет соответствовать требованиям CITES.

Научная новизна. Впервые разработана и апробирована методика видовой идентификации осетровых рыб с использованием ПЦР в реальном времени.

Практическая значимость. Видовая идентификация осетровых рыб позволит контролировать производство конкурентоспособной и легализированной продукции аквакультуры, соответствующей требованиям CITES, а также обеспечит выполнение стратегического плана страны по продовольственной безопасности Украины.

Ключевые слова: ДНК-идентификация, полимеразная цепная реакция в реальном времени, митохондриальные ДНК-маркеры, осетровые виды рыб.

ЛИТЕРАТУРА

  1. Войнова Н. В. Генетическая паспортизация осетровых: практические и теоретические аспекты. Москва: ВНИРО, 2004. 189 с.
  2. Мюге Н. С. Полиморфизм контрольного региона митохондриальной ДНК восьми видов осетровых и разработка системы ДНК-идентификации видов//Генетика. 2008. № 7. С. 913—919.
  3. Identification of interspecific hybrids by amplified fragment length polymorphism: the case of sturgeon/ Congiu L. et al.//Mol. Ecol. 2001. Vol. 10. P. 2355—2359. https://doi.org/10.1046/j.0962-1083.2001.01368.x 
  4. Применение молекулярно-генетических исследований в аквакультуре осетровых рыб/Козлова Н. В. и др.//Вестник АГТУ. 2013. № 3. С. 113—117. (Серия: Рыбное хозяйство).
  5. Барминцева А. Е. Использование микросателлитных локусов для установления видовой принадлежности осетровых (Acipenseridae) и выявления особей гибридного происхождения//Генетика животных. 2013. Т. 49, № 9. С. 1093—1105.
  6. Molecular genetic analysis among subspecies of two Eurasian sturgeon species, Acipenser baerii and A. stellatus/Doukakis P. et al.//Mol Ecol. 1999. Vol. 12. P. 117—127. https://doi.org/10.1046/j.1365-294X.1999.00816.x 
  7. Raymakers C. CITES, the Convention on International Trade in Endangered Species of wild fauna and flora: its role in the conservation of Acipenseriformes//J. Appl. Ichthyol. 2006. Vol. 22 (Suppl. 1). P. 53—65. https://doi.org/10.1111/j.1439-0426.2007.00929.x 
  8. Впровадження генетичної паспортизації осетрових в Україні/Малишева О. О. та ін.//Тваринництво України. 2015. № 9. С. 12—15.
  9. Генетическая паспортизация производителей осетровых рыб/Войнова Н. В. и др.//Новые технологии в защите биоразнообразия в водных экосистемах: Междунар. конф.: матер. Москва, 2002. С. 91.
  10. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Москва: Мир, 2002. 589 с.
  11. Kinetic PCR: Real time monitoring of DNA amplification reactions/Higuchi R. et al.//Biotechnology. 1993. Vol. 11. P. 1026—1030. https://doi.org/10.1038/nbt0993-1026 
  12. The polymerase chain reaction: clinical applications/White T. J. et al.//Adv. Clin. Chem. 1992. Vol. 29. P. 161—196. https://doi.org/10.1016/S0065-2423(08)60224-3 
  13. Jin Li G., Makrigiorgos G. M. Anti-primer quenching-based real-time PCR for simplex or multiplex DNA quantification and single-nucleotide polymorphism genotyping//Nature Protocols. 2007. Vol. 2, iss. 1. P. 50—58. https://doi.org/10.1038/nprot.2007.11 
  14. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве/Зиновьева Н. А. и др. Дубровицы: ВИЖ, 1998. 47 с.
  15. Rapid and Simple Method for Purification of Nucleic Acids/Boom R. et al.//Journal of Сlinical Microbiology. 1990. Vol. 28. P. 495—503.
  16. Carter M. J., Milton I. D. An inexpensive and simple method for DNA purifications on silica particles//Nucleic Acids Res. 1993. Vol. 21. P. 1044—1046. https://doi.org/10.1093/nar/21.4.1044 
  17. Ребриков Д. В., Саматон Г. А., Трофимов Д. Ю. ПЦР в реальном времени. 2-е изд., испр. и доп. Москва: Бином. Лаборатория знаний, 2009. 223 с.