Ribogospod. nauka Ukr., 2013; 4(26): 66-74
DOI: https://doi.org/10.15407/fsu2013.04.066
УДК [597-146.3:597-146.5]:597.553.2

pdf35

ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПОЛА У ДУНАЙСКОГО ЛОСОСЯ (HUCHO HUCHO) МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ

Ю. П. Рудь, Этот адрес электронной почты защищен от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра. , Институт рыбного хозяйства НААН, г. Киев
В. Ю. Филиппов, Этот адрес электронной почты защищен от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра. , Институт рыбного хозяйства НААН, г. Киев
Л. П. Драган, Этот адрес электронной почты защищен от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра. , Институт рыбного хозяйства НААН, г. Киев
Л. П. Бучацкий, Этот адрес электронной почты защищен от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра. , Институт рыбного хозяйства НААН, г. Киев

Цель. Проанализировать нуклеотидные последовательности хромосомы Y лососевых видов рыб и определить фрагмент для подбора специфических олигонуклеотидных праймеров, а также на основе ПЦР разработать метод идентификации пола у дунайского лосося H. hucho.

Методика. С помощью алгоритмов ClustalW в программном обеспечении MEGA версии 5.2 были проанализированы нуклеотидные последовательности хромосомы Y лососевых видов рыб. Для разработки экспресс-диагностики пола у дунайского лосося был взят метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Последовательность нуклеотидов в продуктах амплификации была исследована секвенированием.

Результаты. На основе ПЦР разработан метод идентификации пола у дунайского лосося H. hucho. Показано, что специфические олигонуклеотидные праймеры продуцируют ампликоны размером около 450 пар нуклеотидов, которые характерны только для самцов дунайского лосося. Также показано, что подобранные праймеры могут быть использованы в диагностике самцов радужной форели Oncorhynchus mykiss, что свидетельствует о высокой консервативности локуса sdY, который присутствует в хромосоме Y большинства лососевых рыб.

Научная новизна. Определен высококонсервативный локус sdY для подбора специфических олигонуклеотидных праймеров, которые фланкируют половой ДНК-маркер у самцов.

Практическая значимость. Экспресс-диагностика пола у дунайского лосося с помощью разработанного метода позволит идентифицировать самцов-реверсантов в процессе гормональной реверсии пола. На этапе отбора реверсантов этот метод позволит идентифицировать генотипических самцов (XY) в опытной группе, которые не должны использоваться в следующем спаривании с целью получения 100 %-го поколения самок дунайского лосося.

Ключевые слова: дунайский лосось (Hucho hucho), специфический половой локус, ПЦР, реверсия пола.

ЛИТЕРАТУРА

1. Sacobie C. F. D. Sex differentiation and early gonadal development in brook trout / C. F. D. Sacobie, T. J. Benfey // North American Journal of Aquaculture. ― 2005. ― Vol. 67. ― P. 181―186. http://dx.doi.org/10.1577/A04-059.1
2. Genetic determination and temperature effects on turbot Scophthalmusmaximus sex differentiation : An investigation using steroid sex-inverted males and females / P. Haffray, E. Lebegue, S. Jeu [et al.] // Aquaculture. ― 2009. ― Vol. 294. ― P. 30―36. http://dx.doi.org/10.1016/j.aquaculture.2009.05.004
3. Sex change in coral reef fish / M. Nakamura, Y. Kobayashi, S. Miura [et al.] // Fish Physiology and Biochemestry. ― 2005. ― Vol. 31 (2-3). ― P. 117―122. http://dx.doi.org/10.1007/s10695-006-7595-x
4. Dunham R. A. Aquaculture and fisheries biotechnology: genetic approaches / Dunham R. A. ― CABI Publishing : Wallingford, 2004. ― 372 p. http://dx.doi.org/10.1079/9780851995960.0000
5. Sambrook J. Molecular cloning: a laboratory manual 3rd edition / J. Sambrook, D. W. Russell. ― New York : Cold Spring Harbour, 2001.
6. Chromosome painting supports lack of homology among sex chromosomes in Oncorhynchus, Salmo, and Salvelinus (Salmonidae) / R. B. Phillips, N. R. Konkol, K. M. Reed [et al.] // Genetica. ― 2001. ― Vol. 111. ― P. 119―123. http://dx.doi.org/10.1023/A:1013743431738
7. Rud Yu.P. PCR based method for rapid determination of sex in rainbow trout / Yu. P. Rud, I. B. Vladimirsky, L. P. Buchatsky // Aquaculture of Central and Eastern Europe : present and future. 2nd NACEE Conference (Chiсinău, October 17-19, 2011) : Pontos, Chiсinău, 2011. ― P. 224―226.
8. The sexually dimorphic on the Y-chromosome gene (sdY) is a conserved male-specific Y-chromosome sequence in many salmonids / A. Yano, B. Nicol, E. Jouanno [et al.] // Evolutionary Applications. ― 2013. ― Vol. 6. ― P. 486―496. http://dx.doi.org/10.1111/eva.12032
9. DMY is a Y-specific DM-domain gene required for male development in the medaka fish / M. Matsuda, Y. Nagahama, A. Shinomlya [et al.] // Nature. ― 2002. ― Vol. 417. ― P. 559―563. http://dx.doi.org/10.1038/nature751
10. Characterization of sex chromosomes in rainbow trout and coho salmon using fluorescence in situ hybridization (FISH) / P. Iturra, N. Lam, M. Fuente [et al.] // Genetica. ― 2001. ― Vol. 111. ― P. 125―131. http://dx.doi.org/10.1023/A:1013725717142
11. Devlin R. H. Sex determination and sex differentiation in fish: An overview of genetic, physiological, and environmental influences / R. H. Devlin, Y. Nagahama // Aquaculture. ― 2002. ― Vol. 208. ― P. 191―364. http://dx.doi.org/10.1016/S0044-8486(02)00057-1
12. Extensive screening of sturgeon genomes by random screening techniques revealed no sex-specific marker / S. Wuertz, S. Gaillard, F. Barbisan [et al.] // Aquaculture. ― 2006. ― Vol. 258. ― P. 685―688. http://dx.doi.org/10.1016/j.aquaculture.2006.03.042